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Download e-book for kindle: Elektronenmikroskopische Laborpraxis: Eine Methodensammlung by Professor Dr. Walter Nagl (auth.)

By Professor Dr. Walter Nagl (auth.)

ISBN-10: 3540106154

ISBN-13: 9783540106159

ISBN-10: 3642679765

ISBN-13: 9783642679766

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Es mu~ auch an dieser Stelle betont werden, d~ es sich oft lohnt, etwas zu experimentieren, urn die optimale Puffer-/Fixativ-Kombination zu fmden. B. das Glykogen wahrend der Fixierung leicht in Losung und ist dann nicht mehr zu sehen. Hier zeigte sich empirisch, da~ Formaldehydfixierung in 0,18 M Na-Phosphatpuffer das geeignetste Elektrolytenmilieu schafft, urn die Proteine so fein zu vernetzen, d~ das Glykogen nicht "fliehen" kann. Mischftxierung. In jiingerer Zeit empfehlen manche Autoren eine Mischfixierung mit Glutaraldehyd und OS04 (Konzentrationsbereich: 0,5% : 1,5% bis 2% : 2%) und nachfolgender reiner OS04 -Postfixation, je I h bei 4°C.

Aus den oben genannten Grunden fertigt man zuerst einen 1-2 ~m dicken Semidiinnschnitt an. Der Schnitt wird entweder auf einen kugelfOrmig endenden G1asstab aufgerollt (Abb. 11) oder mit einem feinen Pinse1 aufgenommen oder mit Hilfe einer k1einen Drahtschlinge in einem Wassertropfen schwimmend yom Messertrog entfemt. Hierauf wird er auf einen G1asobjekttrager mit einem kleinen Wassertropfen iiberfiihrt und durch 1eichtes Erhitzen getrocknet und festgeklebt (Heizp1atte oder Spiritusflamme). Semidiinnschnitte werden yor allem im Phasenkontrast untersucht.

Filtrieren reinigt die Losung wieder. Die 4%ige Stammlosung kann einige Wochen aufbewahrt werden; zur Fixierung wird auf 1% verdiinnt. Die Losung wird leicht schwarz, vor allem bei Verwendung von PIPES-Puffer oder wenn nicht absolut saubere Gef~e verwendet wurden. Sie sollte dann verworfen werden (an manchen Orten kaufen Firmen die alten Losungen zum Recycling zuruck). Formaldehyd (Formalin). Dieser in der lichtmikroskopischen Paraffinschnittechnik weit verbreitete Monoaldehyd stabilisiert die Proteine nicht so stark wie Glutar(di)aldehyd.

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Elektronenmikroskopische Laborpraxis: Eine Methodensammlung mit Bildbeispielen für Lehre und Forschung in der Medizin und Zellbiologie by Professor Dr. Walter Nagl (auth.)


by William
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